J. Anim. Sci. 2012.90:334–336
OBJETIVO
Valorar la acción inhibitoria de dos fuentes de óxido de zinc sobre el crecimiento ex vivo de dos bacterias del intestino delgado de lechones destetados.
MATERIAL & MÉTODOS
MUESTRAS
Muestras intestinales y estomacales de quimo yeyunal y estomacal de lechones de 42 día (n=6), transferidas a una atmósfera anaeróbica (95% N2, 5% H2) y diluidos (1:10 vol/vol) en medio para clostridios reforzado (RCM)
DISEÑO EXPERIMENTAL
- Generación del medio enriquecido en zn y condiciones de incubación
Medio saturado de Zinc(1) (de grado analítico de ZnO p.a., Sigma, Deisenhofen, Alemania; HiZox, Animine, Sillingy, Francia) mediante la adición de 10 g de fuente de zinc a 100 mL de RCM, pH 6.5, removiendo durante 1 h a temperatura ambiente y autoclavando (121°C, 15 minutos, 1 bar) Centrifugando (10,000 × g, 10 minutos, 4°C).
(1) Los medios fueron ajustados a una concentración idéntica de zinc (80 μg/mL) y diluidos con RCM (concentraciones finales: 80, 40, 20, y 10 μg ZnO/mL medio). Trabajando en condiciones anaeróbicas, las diluciones de muestras intestinales (20 μL) fueron inoculadas en 180 μL de medio en las cubetas de microtitulación, en concentraciones crecientes de zinc. Se usó un lector de placas de microtitulación capaz de incubar en condiciones anaeróbicas (TecanInfinitePro, Groedig, Austria) para medir la turbidez cada 5 minutos en un periodo de 22 h.
RESULTADOS
La nueva preparación de zinc mostró mayor solubilidad que el ZnO de grado analítico. A pH 6,5 se observó un incremento de la solubilidad de 1.4 veces (640 μg/mL y 878 μg/mL para el ZnO y para la nueva preparación de óxido de zinc, respectivamente).
Figura 2. Presentación tridimensional de la depresión inicial del crecimiento de las bacterias de muestras estomacales en forma de OD diferencial (resta de las OD de las incubaciones control con medio suplementado de ZnO; media de 6 incubaciones). (A) ZnO p.a.; (B) HiZox, Animine, Sillingy, Francia
Periodo de latencia del crecimiento de bacterias intestinales de muestras de estómago y yeyuno:
El bajo pH en el estómago incrementa la solubilidad del óxido de zinc, lo que comportaría mayor periodo de latencia de crecimiento de las muestras del estómago. Debido a una mayor “bioaccesibilidad,” las concentraciones reales de zinc libre podrían diferir entre las dos fuentes, aunque las concentraciones totales fueron idénticas. Los mayores periodos de latencia fueron para la nueva fuente de óxido de zinc en las muestras estomacales.
La ausencia de diferencias en las muestras intestinales podrían ser el resultado de la reducción del crecimiento de las bacterias lácticas en el estómago, mientras que una mayor diversidad de los grupos bacterianos en el yeyuno podría significar una mayor adaptación al zinc, y en consecuencia mostrar un crecimiento más rápido.
Figura 3. Presentación tridimensional de la depresión inicial del crecimiento de las bacterias de muestras yeyunales en forma de OD diferencial (resta de las OD de las incubaciones control con medio suplementado de ZnO; media de 6 incubaciones). (A) ZnO p.a.; (B) HiZox, Animine, Sillingy, Francia
CONCLUSIONES
Estos resultados vuelven a confirmar que mayores concentraciones de zn2+ bioaccesible deben haber estado presentes en el medio suplementado con la nueva preparación de óxido de zinc.
En conclusión, la nueva preparación de zinc(*) mostró mayores efectos depresores del crecimiento de bacterias que el óxido de zinc de grado analítico debido a sus distintas propiedades fisicoquímicas.
(*) HiZox, producto distribuido por Qualivet , Distribuidor para España y Portugal